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窖泥功能菌的純化分離及在百年老窖上的應用(1)
來源:  2015-12-21 10:52 作者:

     窖池是濃香型大曲酒生產的基礎設備,是酒醅發酵的密閉容器。窖泥作為其組分,與曲酒的生產關系密切。

     在酒醅長期發酵的過程中,經微生物發酵產生的有機酸、乙醇、酯香類物質等逐漸浸泡到窖泥中,窖泥作為粗制培養基,富集培養成產酯生香的厭氧功能菌,這些功能菌中的優勢微生物群落為梭狀芽孢桿菌,它能利用底物產生乙酸、丁酸及少量己酸,為生成白酒中的主題香味物質——己酸乙酯做基礎物質。

     使用人工窖泥大大縮短了窖泥老熟的過程,為濃香型曲酒的質量奠定了基礎。但以前由于我們人工窖泥的配方一直采用“七星北斗”工藝,培養配方不合理,菌種易老化,以及在生產過程的操作不當、養護不到位,致使一段時間后出現老化。

     過去,我們多采取定期更換窖泥的方法,但新更換的窖泥在一兩年內又影響糧食酒的質量。自2001年以來,我們公司根據多年的研究,從自己的優質老窖池窖泥中分離適合自己的窖泥功能菌,同時更新窖泥配方,提出了打造百年老窖的新思路。

     窖泥功能菌是指棲息在優質老窖泥中,長期生長、代謝和繁殖,對濃香型白酒典型風格的形成起著關鍵作用的多種有益微生物群系。應用其培養的功能性窖泥是指通過強化有益功能菌的種類和數量,改善微生物的生長環境,使有益功能菌在良好的環境中,長期處于旺盛繁殖狀態的人工窖泥。其主要特點為:使用功能性窖泥改造窖池,可加速新泥老熟,延長窖泥使用周期,改善窖泥風味,增加窖泥酯香,驅除窖泥臭味,防止窖泥老化,完善酒體風格,提高酒體質量。

     1.窖泥功能菌的分離與純化

     1.1 試驗材料

     1.1.1 我公司一車間30年以上窖齡的優質窖池池底窖泥。

     1.1.2 窖泥功能菌分離培養基:K2HPO4  0.04 %,(NH4)2SO4  0.05%,CH3COONa  0.5%,CaSO4  1% ,MgSO4  0.02%,酵母膏0.1%,乙醇2%,瓊脂 2%,pH7。

     1.1.3 無菌吸管、試管、培養皿、生理鹽水、活塞真空干燥器。

     1.2 試驗方法

     1.2.1 系列稀釋:稱取10克窖泥,制成10-2、10-3、10-4、10-5 等不同濃度的懸液。

     1.2.2 傾倒平皿稀釋:取3只培養皿,編號,選擇適宜的稀釋度10-3、10-4、10-5,分別從中吸取0.2mL懸液,加入空皿中,然后將經滅菌的固體培養基用水浴融化,待冷卻至50—55度時,分別倒入平皿,每皿約傾倒15mL,迅速搖勻后置于桌面,整個過程應在酒精燈火焰附近操作。

     待培養基凝固后,將培養皿置于80kpa真空度的干燥器中,于32℃—34℃恒溫培養5天。

     1.2.3 劃線分離:左手持平皿,右手持接種針。用接種針在火焰上滅菌后,沾取一環適宜稀釋度的懸液,在火焰附近用左手拇指、食指掀開皿蓋,迅速劃線,將平皿分成3個區域。劃線后的培養皿置于80kpa真空度的干燥器內,于32℃—34℃恒溫培養5天。

     1.2.4純化:分離工作反復進行,直至獲得滿意的單菌落群培養為止。

     2.窖泥功能菌分離純化過程中的檢測和鑒定

     2.1 直觀檢驗

     從平皿中選取生長良好的菌落,用接種環取一環接種于盛有巴氏液體培養基的細頸試管中,在厭氧條件下培養:

     第1—3天,基本上不產己酸;

     第4—6天,有少量氣泡產生,菌種大量繁殖,并開始產己酸;

     第7—8天,文章來源華夏酒報成熟,顏色由白色轉為淡黃色,最終pH 值為6.0—6.5,有突出的己酸味;

     繼續培養至10—12天,產酸量達到高峰,經色譜分析,己酸含量達200—250mg/100mL。

     2.2 顯微鏡檢查

     窖泥功能菌在顯微鏡下,菌體呈梭狀,革蘭氏染色陰性。其伴生菌是一種產甲烷菌,也是革蘭氏陰性菌,但直徑小于己酸菌;其污染菌丁酸菌是革蘭氏陽性梭狀芽孢桿菌。

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編輯:張怡
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