5—羥甲基糠醛(5—Hydroxymethyl furfural,簡稱5—HMF)是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產生的一個醛類化合物。該化合物穩定性不好,容易分解成乙酰丙酸和甲酸,或發生聚合反應。一方面,5—HMF對人體橫紋肌和內臟有損害;另一方面,葡萄糖注射液在高溫情況下顏色容易變黃,雖然5—HMF本身無色,但由于5—HMF可發生聚合而由聚合物導致變色,且葡萄糖注射液顏色的深淺與5—HMF產生量成正比。
5—HMF的量可指代產品中葡萄糖的分解程度,葡萄糖有α—葡萄糖和β—葡萄糖兩個異構體,它們與鏈式結構A存在平衡,通過鏈式結構A可生成大量的四氫呋喃類物質。經過脫水反應后生成 5—羥甲基糠醛, 5—羥甲基糠醛受熱后再生成 5—甲基糠醛、糠醛和其它呋喃類物質。因此,糠醛、 5—甲基糠醛和 5—羥甲基糠醛是葡萄糖 主要裂解產物。5—羥甲基糠醛含量指標控制為小于300ppm。
1 試劑
乙酸乙酯、乙腈 、乙酸、乙酸鹽緩沖液、標準品:5—羥甲基糠醛純度>99%、5—羥甲基糠醛標準儲備液、5—羥甲基糠醛標準工作液。
1.1 冰醋酸(分析純);
1.2 乙酸乙酯(分析純);
1.3 乙腈:色譜純 一級品 含量>99.9%;
1.4 醋酸溶液:c(CH3COOH)=0.2mol/L;
1.5 醋酸鈉溶液:c(CH3COONa)=0.2mol/L;
1.6 醋酸鹽緩沖溶液(pH=4.00):醋酸水溶液:醋酸鈉水溶液=164:36(v/v);
無水碳酸鈉溶液:c(Na2CO3)=14g/L。
圖譜1
峰參數1
圖譜2
峰參數2
2 檢驗步驟
2 .1試樣溶液的制備:
稱取試樣4. 8g―5. 2g,置于125ml的心形瓶中,用約25ml蒸餾水稀釋,然后加入30ml乙酸乙酯振蕩5min,靜置分層。將水層放入另一個心形瓶中,用30ml乙酸乙酯重復萃取兩次,棄去水層,合并三次乙酸乙酯萃取液于另一心形瓶中,再加入10ml碳酸鈉水溶液立即振蕩,靜置分層(此凈化操作應在文章來源華夏酒報2min內完成)。再用20ml乙酸乙酯提取碳酸鈉水層一次。棄去碳酸鈉水層,合并乙酸乙酯提取液,并加入9滴冰醋酸,全部轉移至旋轉蒸發器內,于40℃―45℃下,蒸至剩余溶液約為1ml―2ml時,卸下心形瓶,在40℃下用氮氣吹干,用1ml醋酸鹽緩沖溶液溶解殘留物,用帶有0.45μm水系濾膜的針頭式過濾器濾入樣品瓶,作為試樣溶液。如果試樣溶液不能及時測試時,應先存放在冰箱中冷藏,但不得超過48小時。
2 .2 5—羥甲基糠醛標準儲備液配制:
稱取10mg的羥甲基糠醛,用乙酸鹽緩沖溶液稀釋成100ug/ml的標準儲備液。
2 .3 5—羥甲基糠醛標準工作液配制:
將上述標準儲備液再用乙酸鹽緩沖溶液配制成濃度為10ug/ml標準工作液。
3 儀器
美國戴安公司生產ICS300離子色譜,Ultimate3000 varible waveleng detector紫外檢測器。旋轉蒸發儀、一次性濾膜0.45um 、1ml—5ml、5ml—10ml加樣槍,色譜柱Diamonsil5uc18 250×4.6mm,美國密理博公司生產的Direct—Q3超純水機。
4 色譜條件
ICS300離子色譜、紫外檢測器、5uc18 250×4.6mm色譜柱。
流動相: 乙腈:水=10:90(v/v);
流速: 1.0ml/min;
柱溫:35℃;
檢測波長: 276nm;
進樣體積: 10μl;
保留時間:羥甲基糠醛5.2min。
上述操作參數可根據儀器情況對給定的參數做適當的調整,以期獲得最佳效果。
5 色譜測定
準確注射10uL樣液于離子色譜儀中,進行分析,響應值均在儀器檢測的線性范圍內。對標準工作液和樣液等體積參插進樣測定,以外標法定量。在色譜條件下,5—羥甲基糠醛保留時間5. 2分鐘左右。
從上述分析情況來看,果汁中5—羥甲基糠醛的含量很低。主要是要在果汁的壓榨工藝過程中,在高溫或弱酸條件下脫水等工藝條件及衛生條件的嚴格控制下,最大程度上降低5—羥甲基糠醛成分的產生。